R26-CAG-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP
品系全名
C57BL/6Smoc-Gt(ROSA)26Sorem1(CAG-Loxp-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP)Smoc
目錄號
NM-KI-18007
品系狀態(tài) 精子凍存
基因信息
基因名
Gt(ROSA)26Sor
品系描述
將CAG-LSL-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP-WPRE-pA插入到小鼠Rosa26基因中，建立CRISPRi基因表達調(diào)控工具小鼠。該小鼠已去掉stop。
CRISPRi是基于一個沒有核酸酶活性的dCas9蛋白，當dCas9被引導(dǎo)到某個基因的轉(zhuǎn)錄起始位點TSS（transcription start site）時，dCas9能夠物理性阻礙RNA聚合酶的通過，導(dǎo)致基因沉默。為了進一步提高轉(zhuǎn)錄抑制的效率，dCas9可以融合一些基因抑制結(jié)構(gòu)域，如KRAB（krüppel-associated box）結(jié)構(gòu)域，強化抑制效果。
應(yīng)用領(lǐng)域：CRISPRi,基因調(diào)控工具
*使用本品系發(fā)表的文獻需注明: R26-CAG-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP mice (Cat. NO. NM-KI-18007) were purchased from Shanghai Model Organisms Center, Inc..
驗證數(shù)據(jù)
通過Westernblot驗證2xKRAB-dCas9表達
Rosa26- CAG-LSL-2xKRAB-dCas9?mice were crossed with Dppa3-Cre mice to delete STOP cassette.
圖1 該小鼠含有l(wèi)oxp-STOP-loxp結(jié)構(gòu)，是條件性過表達2XKRAB-dCas9，需要和Cre交配才能表達2XKRAB-dCas9 。該小鼠和廣泛表達的Cre(Dppa3-Cre)交配后檢測Cas9表達，westernblot檢測發(fā)現(xiàn)Cas9在肝臟、脾、肺、腎、胸腺、皮質(zhì)和小腦中都高表達。
通過熒光測定驗證EGFP表達
圖2 該小鼠和廣泛表達的Cre（Dppa3-Cre）交配后檢測EGFP表達，檢測發(fā)現(xiàn)大腦、肺、腎、胸腺、肝臟中EGFP表達較強。
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