實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法，或者通過(guò)目的基因和內(nèi)參基因的△△Ct比值進(jìn)行相對(duì)定量法。該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)RNA模板的定量而且具有靈敏度高、特異性和可靠性更強(qiáng)、能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動(dòng)化程度高、無(wú)污染性、具實(shí)時(shí)性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)步驟：

? 1. 樣品獲取、處理和制備

? ?? 1.1 懸浮細(xì)胞：將懸浮細(xì)胞1×10⁶ 個(gè)/ml培養(yǎng)液倒入離心管中，離心沉淀細(xì)胞。PBS沖洗2次，將細(xì)胞離心底部，向離心管中加入500-1000μl Trizol，然后置于-80度冰箱保存。或者將離心底部的干細(xì)胞置于-80度冰箱保存。

? ?? 1.2 貼壁細(xì)胞：用胰酶消化細(xì)胞1×10⁶個(gè)/ml，離心PBS沖洗2次，將細(xì)胞離心底部，向離心管中加入500-1000μl Trizol，然后置于-80度冰箱保存?；蛘邔㈦x心底部的干細(xì)胞置于-80度冰箱保存。

? ?? 1.3 組織：采集新鮮組織100mg，放入離心管中，做好標(biāo)記，于液氮冷凍片刻后，置于-80度冰箱保存。

? ?? 1.4 血液：用抗凝管收集的全血1ml，加入RNA保護(hù)劑，做好標(biāo)記，置于-80度冰箱保存。

? 2. RNA或DNA質(zhì)控

? 3. 反轉(zhuǎn)錄

? 4. 引物驗(yàn)證

? 5. qPCR過(guò)程

? 6. 數(shù)據(jù)分析

我們提供：

? 1. 抽取的RNA和電泳圖及逆轉(zhuǎn)錄的cDNA樣本

? 2. 操作步驟及詳細(xì)的試劑和耗材

? 3. 引物序列

? 4. 溶解曲線和擴(kuò)增曲線

? 5. 原始數(shù)據(jù)及處理后的正式實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）是將蛋白質(zhì)電泳分離技術(shù)與免疫標(biāo)記技術(shù)結(jié)合所形成的一種鑒定特異性抗原的方法。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印應(yīng)先將含某抗原的蛋白混合物進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳，使各種蛋白成分根據(jù)分子量的不同分離開來(lái)；再通過(guò)電轉(zhuǎn)移將各種蛋白成分轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜（NC）或PVDF膜上；通過(guò)特異試劑（抗體）作為探針，與膜上的相應(yīng)抗原發(fā)生結(jié)合，再與酶標(biāo)記的抗Ig 抗體結(jié)合，洗滌后加入底物進(jìn)行顯色。根據(jù)顯色條帶的位置和深淺，可以對(duì)抗原及其分子量或相對(duì)含量進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、細(xì)胞或組織蛋白提取和定量。

2、SDS-PAGE

3、轉(zhuǎn)膜

4、封閉

5、免疫反應(yīng)

6、掃膜等圖像采集

7、數(shù)據(jù)分析

我們提供：

1、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后剩余樣品

2、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

3、原始條帶的熒光或灰度圖

實(shí)驗(yàn)器材：

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Odyssey紅外熒光掃描成像系統(tǒng)

結(jié)果示意圖

服務(wù)周期：1個(gè)月

溫馨提示：

1. 細(xì)胞樣品10⁶個(gè)以上，收集干細(xì)胞后放-80℃冰箱或液氮保存

2. 組織樣品100mg以上, -80℃冰箱或液氮保存

3. 一抗、核（膜）蛋白抽提試劑盒需客戶提供

4. 內(nèi)參免費(fèi)（一般選用GAPDH內(nèi)參）