MDA-MB-231-Luc?是來(lái)源于人乳腺癌細(xì)胞，經(jīng)含 Luciferase 病毒轉(zhuǎn)染后，形成的具有 Luciferase 熒光素酶的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

·?皮下成瘤檢測(cè)，表明該細(xì)胞系在 M-NSG 小鼠皮下能正常成瘤。

·?在 M-NSG 小鼠股骨位接種成瘤，結(jié)果顯示體內(nèi) Luciferase?熒光信號(hào)穩(wěn)定上升。

·?在 M-NSG 小鼠乳房脂肪墊接種能成瘤，且切除原位腫瘤后，發(fā)現(xiàn)能發(fā)生轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)移部位大部分聚集在肝臟部位。

·?在 M-NSG?和 Balb/C?nude小鼠頸動(dòng)脈注射后，均能形成腦轉(zhuǎn)移，且腦部Luciferase 熒光信號(hào)有明顯增長(zhǎng)。

一、細(xì)胞形態(tài)

在10倍倒置顯微鏡下觀察，該細(xì)胞系的形態(tài)如下圖所示：

圖一、 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞形態(tài)圖

二、細(xì)胞 Luciferase 活性檢測(cè)

常規(guī)對(duì)構(gòu)建的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞進(jìn)行 Luciferase?活性檢測(cè)，結(jié)果如下圖所示：

圖二、 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞 Luciferase 活性檢測(cè)

三、細(xì)胞皮下成瘤性驗(yàn)證

為驗(yàn)證?MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞系能否實(shí)現(xiàn)皮下成瘤，我們?cè)O(shè)計(jì)了在 M-NSG??小鼠皮下接種較高劑量的 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞，如下圖所示：

圖三、（A） MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞系在 M-NSG 小鼠中的成瘤曲線。（B）小鼠體重變化趨勢(shì)。 （C）小鼠生存曲線。(n=9)

四、細(xì)胞股骨位接種成瘤性驗(yàn)證

為驗(yàn)證 MDA-MB-231-Luc 能否在股骨處成瘤，我們從股動(dòng)脈注射一定劑量的該細(xì)胞。

（一）小鼠體內(nèi) Luciferase 熒光信號(hào)變化

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)規(guī)律性檢測(cè)小鼠股骨處仰臥位和俯臥位 Luciferase 熒光信號(hào)，結(jié)果分別如圖所示：

圖四、（A）仰臥位 Luciferase?熒光信號(hào)變化曲線圖 （B）俯臥位?Luciferase?熒光信號(hào)變化曲線圖 (n=4~5)

（二）小鼠體重變化趨勢(shì)和生存曲線

圖五、（A）各組小鼠體重變化趨勢(shì) (n=4~5)

? ? ? ? ? ?（B）各組小鼠生存曲線圖 (n=4~5)?

（三）小鼠活體成像圖

不同時(shí)間點(diǎn)仰臥位和俯臥位小鼠的活體成像圖，如下圖所示：

圖六、不同時(shí)間點(diǎn)仰臥位和俯臥位小鼠活體成像圖

五、細(xì)胞乳房脂肪墊接種成瘤性與轉(zhuǎn)移性驗(yàn)證

在?M-NSG 小鼠乳房脂肪墊接種成瘤實(shí)驗(yàn)，兩個(gè)乳房墊部位接種相同劑量的MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞。結(jié)果顯示MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞在?M-NSG 小鼠乳房脂肪墊接種能成瘤，且接種后發(fā)現(xiàn)其能發(fā)生轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)移部位大部分聚集在肝臟部位。

（一）M-NSG 小鼠乳房脂肪墊接種成瘤

圖七、MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞在乳房墊部位的成瘤曲線圖 (n=5)

（二）小鼠體內(nèi) Luciferase 熒光信號(hào)變化

在測(cè)量腫瘤的同時(shí)，我們也檢測(cè)了兩個(gè)乳房墊部位的 Luciferase?熒光信號(hào)，結(jié)果如下圖所示：

圖八、接種的兩個(gè)乳房墊部位 Luciferase?熒光信號(hào)變化曲線圖 (n=5)

（三）乳房墊部位小鼠活體成像圖

為了進(jìn)一步直觀的觀察出接種的乳房墊部位的熒光反應(yīng)情況，我們?cè)O(shè)計(jì)了在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠進(jìn)行活體成像拍攝，如下圖所示：

圖九、不同時(shí)間點(diǎn)乳房墊部位的小鼠活體成像圖

（四）乳房墊部接種后小鼠生存曲線

圖十、乳房墊部位接種后的小鼠生存曲線 (n=5)

（五）乳房墊腫瘤切除后腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的小鼠體內(nèi) Luciferase 熒光信號(hào)變化

為了驗(yàn)證在脂肪墊成瘤后把腫瘤切除能否形成轉(zhuǎn)移，我們?cè)谇谐[瘤后，對(duì)小鼠進(jìn)行了熒光收集和活體成像，其熒光信號(hào)變化如下圖所示：

圖十一、腫瘤切除后發(fā)生轉(zhuǎn)移的小鼠體內(nèi) Luciferase?熒光信號(hào)變化曲線圖 (n=3-4)

（六）乳房墊腫瘤切除后腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的小鼠活體成像圖

為了進(jìn)一步直觀的觀察出腫瘤切除后腫瘤轉(zhuǎn)移情況，我們?cè)O(shè)計(jì)了在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠進(jìn)行活體成像拍攝，發(fā)現(xiàn)其發(fā)生了轉(zhuǎn)移，且主要集中在肝臟，如下圖所示：

圖十二、腫瘤切除后的小鼠活體成像圖

六、細(xì)胞頸動(dòng)脈接種及腦轉(zhuǎn)移性驗(yàn)證

為了驗(yàn)證 MDA-MB-231-Luc 細(xì)胞能否形成腦轉(zhuǎn)移，我們分別對(duì) M-NSG 和 Balb/c nude?小鼠進(jìn)行頸動(dòng)脈接種，并采集小鼠腦部的熒光信號(hào)。

（一）小鼠頸動(dòng)脈接種后體內(nèi)Luciferase 熒光信號(hào)變化

圖十三、MDA-MB-231-Luc ?細(xì)胞腦轉(zhuǎn)移后其在腦部 Luciferase?熒光信號(hào)變化

（A）M-NSG?小鼠頸動(dòng)脈接種 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞 (n=3)；

（B）Balb/c nude 小鼠頸動(dòng)脈接種 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞 (n=5)。

（二）小鼠生存曲線

圖十四、小鼠生存曲線

（A）M-NSG?小鼠頸動(dòng)脈接種 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞 (n=3)；

（B）Balb/c nude 小鼠頸動(dòng)脈接種 MDA-MB-231-Luc?細(xì)胞 (n=5)。

（三）小鼠頸動(dòng)脈接種后腦部活體成像圖

圖十五、不同時(shí)間點(diǎn)小鼠腦部活體成像圖