EMT6-hPD-L1細(xì)胞是一個表達(dá)人源PD-L1蛋白的人源化EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞系。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，在該細(xì)胞系中，人源PD-L1蛋白有較強(qiáng)的表達(dá)，鼠源Pd-l1蛋白沒有表達(dá)。小鼠的皮下成瘤實驗表明，該細(xì)胞系與野生型EMT6細(xì)胞系成瘤性無顯著性差異，但是，成瘤后瘤內(nèi)細(xì)胞人源PD-L1蛋白沒有表達(dá)，故該細(xì)胞系只能用于細(xì)胞水平驗證實驗，無法用于體內(nèi)驗證實驗。

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1.?EMT6-hPD-L1人源化細(xì)胞系人源、鼠源PD-L1蛋白表達(dá)檢測

流式細(xì)胞術(shù)檢測EMT6-hPD-L1細(xì)胞系中人源PD-L1和鼠源PD-L1蛋白的表達(dá)，流式檢測結(jié)果顯示，EMT6-hPD-L1細(xì)胞系中僅能檢測到人源PD-L1蛋白的表達(dá)，沒有鼠源PD-L1蛋白的表達(dá)，結(jié)果如圖2所示。

圖1. 流式細(xì)胞術(shù)檢測EMT6-hPD-L1細(xì)胞系人源PD-L1和鼠源PD-L1的表達(dá)。EMT6.WT為野生型EMT6細(xì)胞系對照，EMT6-hPD-L1-2#為EMT6-hPD-L1細(xì)胞系的2#克隆。

2.?成瘤性驗證

為了探究EMT6-hPD-L1細(xì)胞系的成瘤能力，在BALB/c小鼠皮下分別接種相同數(shù)量的野生型EMT6和EMT6-hPD-L1細(xì)胞系，對兩種細(xì)胞系的成瘤能力進(jìn)行比較。結(jié)果顯示兩種細(xì)胞系在成瘤性和腫瘤的生長速度方面上沒有顯著差異，結(jié)果如圖3所示。

圖 2. 野生型EMT6細(xì)胞系和PD-L1人源化EMT6細(xì)胞系皮下接種后的腫瘤生長曲線。每只小鼠皮下接種5E5個細(xì)胞，腫瘤生長曲線從接種后的第7天開始記錄。Wild type EMT6為野生型EMT6細(xì)胞系對照，EMT6-hPD-L1（10#）為EMT6-hPD-L1細(xì)胞系的10#克隆。

3.?EMT6-hPD-L1細(xì)胞系腫瘤中人源PD-L1蛋白表達(dá)檢測

為了進(jìn)一步驗證EMT6-hPD-L1細(xì)胞系成瘤后人源PD-L1蛋白的表達(dá)，通過流式細(xì)胞術(shù)對兩種細(xì)胞系成瘤后腫瘤細(xì)胞中鼠源及人源PD-L1蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示：人源化PD-L1的EMT6細(xì)胞系成瘤后，腫瘤細(xì)胞既不表達(dá)人源PD-L1蛋白，也不表達(dá)鼠源的PD-L1蛋白。也即該細(xì)胞系只能用于細(xì)胞水平驗證實驗，無法用于體內(nèi)驗證實驗。結(jié)果如圖4所示。

圖3: 流式細(xì)胞術(shù)檢測野生型EMT6和EMT6-hPD-L1細(xì)胞系成瘤后腫瘤細(xì)胞鼠源PD-L1和人源PD-L1蛋白表達(dá)。