最近，我們推送了一篇《10個最基本小鼠知識點，你都了解么》，一經(jīng)發(fā)出，后臺收到了很多留言，其中關(guān)于斷頭法，頸椎脫臼法是否算安樂死，引起了大家廣泛爭議。那么究竟斷頭法，頸椎脫臼法能否用于小鼠安樂死，有沒有其他更加合理的安樂死方法，除此之外，我們又該如何實施動物安樂死才符合動物福利和倫理呢？本期我們就參考美國獸醫(yī)協(xié)會（AVMA）的《安樂死指南2020版》為大家一一解答！

日前，美國獸醫(yī)協(xié)會的《安樂死指南2020版》（英文版）已在線發(fā)表。該《指南》是由AVMA組織專家對安樂死方法進行評價后編寫的，每七到十年更新一次，至今已有9版，分別為1963版、1972版、1978版、1986版、1993版、2000版、2007版、2013版及2020版。2020版在前8版的基礎(chǔ)上補充、修訂而成。該指南全面介紹了動物安樂死概念、安樂死方法及實施技術(shù)，并針對實驗動物、家畜、家禽、魚類及野生動物的安樂死技術(shù)分別進行了介紹。

什么是安樂死？

安樂死（Euthanasia）：安樂死一詞來源于古希臘詞euthanatos，意思是美好的死亡。通常是指用不會帶來任何疼痛或痛苦，并能快速喪失意識隨后死亡的方式人道地結(jié)束動物的生命。

安樂死的方法有哪些？

在執(zhí)行安樂死的具體實踐中，分為：

①可接受的方法（Acceptable Methods）

②附有條件可接受的方法（Acceptable with Conditions Methods）

③不可接受的方法（Unacceptable Methods）

其中附有條件可接受的方法需要麻醉，或者借助相關(guān)設(shè)備、人員經(jīng)過培訓后才可使用。

對于嚙齒類的動物，《安樂死指南2020版》提供了哪些安樂死方法呢？我們繼續(xù)往下看吧。

可接受的方法：

藥物注射法：注射過量的藥物，使動物死亡

常用藥物：戊巴比妥鈉是最常見的安樂死制劑，它具有保質(zhì)期長，反應快等優(yōu)點。注射戊巴比妥鈉可以使嚙齒類動物迅速失去知覺，通常安樂死的劑量是麻醉劑量的3倍。

給藥方式：對于嚙齒類動物，可以選擇靜脈注射（IV）或腹腔注射（IP）的方式給藥，有報道稱采用這2種方式注射戊巴比妥鈉，會導致動物出現(xiàn)疼痛，因此在《安樂死指南2020版》中指出，使用戊巴比妥鈉進行安樂死，需聯(lián)合使用局部麻醉藥和抗驚厥藥，以幫助動物緩解疼痛。

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附有條件可接受的方法

1.?吸入法：

吸入有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑，使動物死亡

常用藥物：包括CO、CO2、N2O和鹵代麻醉藥（如乙醚、異氟烷等），其中CO2窒息法在嚙齒類動物中最為常用?？紤]乙醚到對人體有害，嚙齒類動物對CO，N2O有明顯的厭惡感，一般不常使用，下面詳細介紹CO2窒息法。

CO2窒息法：將待安樂死的實驗動物置于可封閉的安樂死裝置中, 釋放CO2使實驗動物窒息而亡。

優(yōu)點：操作簡單，相對安全性高，耗費較低，是嚙齒類動物和其他小型實驗動物的首選。

注意事項：

a.?對于某些動物，如新生的嚙齒動物，對缺氧的耐受性非常高，所以必須要長時間操作才可以保證死亡。對于新生小鼠，CO2需要處理50min才可以確保死亡，新生大鼠，CO2需要處理35min。

b.?使用CO2窒息法時，將有意識的小鼠直接放入100% CO2是不可接受的，會引起動物的不適和痛苦，應該使其先處于誘導期，提供空氣或氧氣，再持續(xù)增加CO2濃度，直到出現(xiàn)呼吸心跳驟停。AVMA要求CO2置換率為每分鐘30%-70%容器體積，以確保在引起疼痛之前，動物已失去意識；

c.?使用此法時，容器內(nèi)勿裝入過多動物造成擁擠，且勿同時放入不同品種的動物，以免造成動物死亡前的窘迫。

2.物理方法

2.1頸椎脫臼法：用力快速將動物脊髓與腦髓斷開，動物會在5-10s喪失意識，常用于體重＜200g的小鼠和大鼠。

優(yōu)點：操作簡單，耗費較低，組織不會被化學物質(zhì)污染

操作方法：操作時實驗人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其它粗糙物體表面，用左手拇指、食指用力向下按壓動物頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離。

2.2 斷頭法：使用斷頭臺或剪刀快速切斷延髓，使頭顱與身體迅速分離，動物會在5-30s喪失意識，主要用于嚙齒目、兔形目、兩棲綱、鳥綱、魚綱等實驗動物。

優(yōu)點：操作簡單，耗費較低，組織不會被化學物質(zhì)污染

操作方法：操作時，實驗人員用左手按住實驗動物的背部，拇指夾住實驗動物右腋窩，食指和中指夾住左前肢，右手用剪刀在鼠頸部垂直將鼠頭剪斷，使實驗動物因腦脊髓斷離且大量出血死亡。

物理方法的注意事項：

a.?為了更好實施物理類方法，確保動物福利，一般采用混合法，如首先對動物使進行麻醉處理，再采用物理方法實施安樂死。這樣既避免了大量麻醉劑的使用，又減輕了動物的痛苦且避免了物理方法所需要的較高的技術(shù)要求。

b.?此類方法殘忍，容易對實驗人員的心理產(chǎn)生負面影響，操作人員必須接受麻醉和死亡動物操作培訓方可實施。對于未受過訓練的人員貿(mào)然使用物理方法，很可能導致動物不能完全死亡而承受巨大的痛苦。

另外，嚙齒類動物胎兒和新生兒安樂死必須特殊對待！

AVMA指出，嚙齒類動物由于受體內(nèi)一系列激素的影響，胎兒在子宮內(nèi)是無意識的，缺氧不會引起任何反應，因此對母鼠進行安樂死后，沒有必要單獨對胎兒進行安樂死。對于新生嚙齒類動物，他們出生時神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不成熟，感覺神經(jīng)在出生后5-7天才發(fā)育完成。因此，胎兒和新生小鼠可采用如下安樂死方法：

1.?藥物注射法：戊巴比妥鈉與局麻藥，抗驚厥藥聯(lián)合注射可用于胎兒和新生兒安樂死

2.?吸入法：吸入CO2對胎兒及新生小鼠是有效的，新生動物由于適應了在母體子宮里的缺氧狀態(tài)，對缺氧有較強的忍耐力，因此作用時間較長,就像上文中提到的，新生小鼠可能需要50min，新生大鼠需要大約35min。在新生兒對疼痛刺激無反應時，可采用輔助方法，如：頸椎脫位或斬首。當使用如乙醚、異氟烷等鹵代麻醉劑時，必須采用輔助方法(如頸椎脫位、斬首)以避免恢復的可能性。

3.?低溫法：出生10天內(nèi)的新生大小鼠可以采用逐漸降溫的方式進行安樂死。需要注意：不可直接將動物直接接觸冰或預冷的表面，因為冷的表面會導致組織損傷，引起動物疼痛，另外超過10天的嚙齒動物不建議使用低溫法。對于無意識的出生5天以內(nèi)的新生大小鼠可以通過液氮快速冷凍法進行安樂死，超過10天的大小鼠可按照成年動物的安樂死方法進行操作。

注意：不管采用何種方式進行安樂死，最終步驟須確認動物是否已經(jīng)死亡。操作人員應確保動物無生命指征（胸腔無起伏，且眼瞼處泛白，無視覺反應等）。結(jié)合動物數(shù)量及操作人員心理素質(zhì)，可采用開腔觀察心跳或者將死亡動物裝入黃色廢棄物袋子后等待30min，之后再次確認是否有存活的動物，若仍有未死亡動物需再次執(zhí)行安樂死。

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不可接受方法：

a. 水合氯醛:?水合氯醛屬于一種催眠藥，它不能保證手術(shù)過程的鎮(zhèn)痛作用，并且過量注射會導致大鼠腸梗阻，腹膜炎以及胃潰瘍等嚴重副反應。安樂死指南明確指出水合氯醛不是合適的安樂死藥物。?

b. N2或Ar: 嚙齒類動物對N2或Ar表現(xiàn)出高度的厭惡感，不建議作為安樂死的吸入劑。

c. 阿片類藥物：用阿片類藥物對實驗室動物實施安樂死是不可接受的，它通常僅作為鎮(zhèn)痛劑使用。

d.?脲烷：脲烷是一種人類致癌物質(zhì)，在一定條件下可用于嚙齒類動物的麻醉。但它起效緩慢，麻醉時間長。

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選擇適合的安樂死方法需從動物種類、動物遭受的疼痛和痛苦、人員安全性、成功率、對操作者情緒影響等多方面考慮。實際工作中，選擇適合的安樂死方法還需由獸醫(yī)結(jié)合現(xiàn)實情況從專業(yè)角度做出判斷。實驗動物作為人類的‘’替難者‘’常用于各類科學實驗，而我們能做的，就是善待實驗動物，善待生命。

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