最近，我們推送了一篇《10個(gè)最基本小鼠知識(shí)點(diǎn)，你都了解么》，一經(jīng)發(fā)出，后臺(tái)收到了很多留言，其中關(guān)于斷頭法，頸椎脫臼法是否算安樂(lè)死，引起了大家廣泛爭(zhēng)議。那么究竟斷頭法，頸椎脫臼法能否用于小鼠安樂(lè)死，有沒(méi)有其他更加合理的安樂(lè)死方法，除此之外，我們又該如何實(shí)施動(dòng)物安樂(lè)死才符合動(dòng)物福利和倫理呢？本期我們就參考美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)（AVMA）的《安樂(lè)死指南2020版》為大家一一解答！

日前，美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)的《安樂(lè)死指南2020版》（英文版）已在線發(fā)表。該《指南》是由AVMA組織專家對(duì)安樂(lè)死方法進(jìn)行評(píng)價(jià)后編寫的，每七到十年更新一次，至今已有9版，分別為1963版、1972版、1978版、1986版、1993版、2000版、2007版、2013版及2020版。2020版在前8版的基礎(chǔ)上補(bǔ)充、修訂而成。該指南全面介紹了動(dòng)物安樂(lè)死概念、安樂(lè)死方法及實(shí)施技術(shù)，并針對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家畜、家禽、魚(yú)類及野生動(dòng)物的安樂(lè)死技術(shù)分別進(jìn)行了介紹。

什么是安樂(lè)死？

安樂(lè)死（Euthanasia）：安樂(lè)死一詞來(lái)源于古希臘詞euthanatos，意思是美好的死亡。通常是指用不會(huì)帶來(lái)任何疼痛或痛苦，并能快速喪失意識(shí)隨后死亡的方式人道地結(jié)束動(dòng)物的生命。

安樂(lè)死的方法有哪些？

在執(zhí)行安樂(lè)死的具體實(shí)踐中，分為：

①可接受的方法（Acceptable Methods）

②附有條件可接受的方法（Acceptable with Conditions Methods）

③不可接受的方法（Unacceptable Methods）

其中附有條件可接受的方法需要麻醉，或者借助相關(guān)設(shè)備、人員經(jīng)過(guò)培訓(xùn)后才可使用。

對(duì)于嚙齒類的動(dòng)物，《安樂(lè)死指南2020版》提供了哪些安樂(lè)死方法呢？我們繼續(xù)往下看吧。

可接受的方法：

藥物注射法：注射過(guò)量的藥物，使動(dòng)物死亡

常用藥物：戊巴比妥鈉是最常見(jiàn)的安樂(lè)死制劑，它具有保質(zhì)期長(zhǎng)，反應(yīng)快等優(yōu)點(diǎn)。注射戊巴比妥鈉可以使嚙齒類動(dòng)物迅速失去知覺(jué)，通常安樂(lè)死的劑量是麻醉劑量的3倍。

給藥方式：對(duì)于嚙齒類動(dòng)物，可以選擇靜脈注射（IV）或腹腔注射（IP）的方式給藥，有報(bào)道稱采用這2種方式注射戊巴比妥鈉，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)疼痛，因此在《安樂(lè)死指南2020版》中指出，使用戊巴比妥鈉進(jìn)行安樂(lè)死，需聯(lián)合使用局部麻醉藥和抗驚厥藥，以幫助動(dòng)物緩解疼痛。

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附有條件可接受的方法

1.?吸入法：

吸入有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑，使動(dòng)物死亡

常用藥物：包括CO、CO2、N2O和鹵代麻醉藥（如乙醚、異氟烷等），其中CO2窒息法在嚙齒類動(dòng)物中最為常用?？紤]乙醚到對(duì)人體有害，嚙齒類動(dòng)物對(duì)CO，N2O有明顯的厭惡感，一般不常使用，下面詳細(xì)介紹CO2窒息法。

CO2窒息法：將待安樂(lè)死的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于可封閉的安樂(lè)死裝置中, 釋放CO2使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物窒息而亡。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，相對(duì)安全性高，耗費(fèi)較低，是嚙齒類動(dòng)物和其他小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的首選。

注意事項(xiàng)：

a.?對(duì)于某些動(dòng)物，如新生的嚙齒動(dòng)物，對(duì)缺氧的耐受性非常高，所以必須要長(zhǎng)時(shí)間操作才可以保證死亡。對(duì)于新生小鼠，CO2需要處理50min才可以確保死亡，新生大鼠，CO2需要處理35min。

b.?使用CO2窒息法時(shí)，將有意識(shí)的小鼠直接放入100% CO2是不可接受的，會(huì)引起動(dòng)物的不適和痛苦，應(yīng)該使其先處于誘導(dǎo)期，提供空氣或氧氣，再持續(xù)增加CO2濃度，直到出現(xiàn)呼吸心跳驟停。AVMA要求CO2置換率為每分鐘30%-70%容器體積，以確保在引起疼痛之前，動(dòng)物已失去意識(shí)；

c.?使用此法時(shí)，容器內(nèi)勿裝入過(guò)多動(dòng)物造成擁擠，且勿同時(shí)放入不同品種的動(dòng)物，以免造成動(dòng)物死亡前的窘迫。

2.物理方法

2.1頸椎脫臼法：用力快速將動(dòng)物脊髓與腦髓斷開(kāi)，動(dòng)物會(huì)在5-10s喪失意識(shí)，常用于體重＜200g的小鼠和大鼠。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，耗費(fèi)較低，組織不會(huì)被化學(xué)物質(zhì)污染

操作方法：操作時(shí)實(shí)驗(yàn)人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其它粗糙物體表面，用左手拇指、食指用力向下按壓動(dòng)物頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離。

2.2 斷頭法：使用斷頭臺(tái)或剪刀快速切斷延髓，使頭顱與身體迅速分離，動(dòng)物會(huì)在5-30s喪失意識(shí)，主要用于嚙齒目、兔形目、兩棲綱、鳥(niǎo)綱、魚(yú)綱等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，耗費(fèi)較低，組織不會(huì)被化學(xué)物質(zhì)污染

操作方法：操作時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員用左手按住實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的背部，拇指夾住實(shí)驗(yàn)動(dòng)物右腋窩，食指和中指夾住左前肢，右手用剪刀在鼠頸部垂直將鼠頭剪斷，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因腦脊髓斷離且大量出血死亡。

物理方法的注意事項(xiàng)：

a.?為了更好實(shí)施物理類方法，確保動(dòng)物福利，一般采用混合法，如首先對(duì)動(dòng)物使進(jìn)行麻醉處理，再采用物理方法實(shí)施安樂(lè)死。這樣既避免了大量麻醉劑的使用，又減輕了動(dòng)物的痛苦且避免了物理方法所需要的較高的技術(shù)要求。

b.?此類方法殘忍，容易對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的心理產(chǎn)生負(fù)面影響，操作人員必須接受麻醉和死亡動(dòng)物操作培訓(xùn)方可實(shí)施。對(duì)于未受過(guò)訓(xùn)練的人員貿(mào)然使用物理方法，很可能導(dǎo)致動(dòng)物不能完全死亡而承受巨大的痛苦。

另外，嚙齒類動(dòng)物胎兒和新生兒安樂(lè)死必須特殊對(duì)待！

AVMA指出，嚙齒類動(dòng)物由于受體內(nèi)一系列激素的影響，胎兒在子宮內(nèi)是無(wú)意識(shí)的，缺氧不會(huì)引起任何反應(yīng)，因此對(duì)母鼠進(jìn)行安樂(lè)死后，沒(méi)有必要單獨(dú)對(duì)胎兒進(jìn)行安樂(lè)死。對(duì)于新生嚙齒類動(dòng)物，他們出生時(shí)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不成熟，感覺(jué)神經(jīng)在出生后5-7天才發(fā)育完成。因此，胎兒和新生小鼠可采用如下安樂(lè)死方法：

1.?藥物注射法：戊巴比妥鈉與局麻藥，抗驚厥藥聯(lián)合注射可用于胎兒和新生兒安樂(lè)死

2.?吸入法：吸入CO2對(duì)胎兒及新生小鼠是有效的，新生動(dòng)物由于適應(yīng)了在母體子宮里的缺氧狀態(tài)，對(duì)缺氧有較強(qiáng)的忍耐力，因此作用時(shí)間較長(zhǎng),就像上文中提到的，新生小鼠可能需要50min，新生大鼠需要大約35min。在新生兒對(duì)疼痛刺激無(wú)反應(yīng)時(shí)，可采用輔助方法，如：頸椎脫位或斬首。當(dāng)使用如乙醚、異氟烷等鹵代麻醉劑時(shí)，必須采用輔助方法(如頸椎脫位、斬首)以避免恢復(fù)的可能性。

3.?低溫法：出生10天內(nèi)的新生大小鼠可以采用逐漸降溫的方式進(jìn)行安樂(lè)死。需要注意：不可直接將動(dòng)物直接接觸冰或預(yù)冷的表面，因?yàn)槔涞谋砻鏁?huì)導(dǎo)致組織損傷，引起動(dòng)物疼痛，另外超過(guò)10天的嚙齒動(dòng)物不建議使用低溫法。對(duì)于無(wú)意識(shí)的出生5天以內(nèi)的新生大小鼠可以通過(guò)液氮快速冷凍法進(jìn)行安樂(lè)死，超過(guò)10天的大小鼠可按照成年動(dòng)物的安樂(lè)死方法進(jìn)行操作。

注意：不管采用何種方式進(jìn)行安樂(lè)死，最終步驟須確認(rèn)動(dòng)物是否已經(jīng)死亡。操作人員應(yīng)確保動(dòng)物無(wú)生命指征（胸腔無(wú)起伏，且眼瞼處泛白，無(wú)視覺(jué)反應(yīng)等）。結(jié)合動(dòng)物數(shù)量及操作人員心理素質(zhì)，可采用開(kāi)腔觀察心跳或者將死亡動(dòng)物裝入黃色廢棄物袋子后等待30min，之后再次確認(rèn)是否有存活的動(dòng)物，若仍有未死亡動(dòng)物需再次執(zhí)行安樂(lè)死。

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不可接受方法：

a. 水合氯醛:?水合氯醛屬于一種催眠藥，它不能保證手術(shù)過(guò)程的鎮(zhèn)痛作用，并且過(guò)量注射會(huì)導(dǎo)致大鼠腸梗阻，腹膜炎以及胃潰瘍等嚴(yán)重副反應(yīng)。安樂(lè)死指南明確指出水合氯醛不是合適的安樂(lè)死藥物。?

b. N2或Ar: 嚙齒類動(dòng)物對(duì)N2或Ar表現(xiàn)出高度的厭惡感，不建議作為安樂(lè)死的吸入劑。

c. 阿片類藥物：用阿片類藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死是不可接受的，它通常僅作為鎮(zhèn)痛劑使用。

d.?脲烷：脲烷是一種人類致癌物質(zhì)，在一定條件下可用于嚙齒類動(dòng)物的麻醉。但它起效緩慢，麻醉時(shí)間長(zhǎng)。

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選擇適合的安樂(lè)死方法需從動(dòng)物種類、動(dòng)物遭受的疼痛和痛苦、人員安全性、成功率、對(duì)操作者情緒影響等多方面考慮。實(shí)際工作中，選擇適合的安樂(lè)死方法還需由獸醫(yī)結(jié)合現(xiàn)實(shí)情況從專業(yè)角度做出判斷。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為人類的‘’替難者‘’常用于各類科學(xué)實(shí)驗(yàn)，而我們能做的，就是善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，善待生命。

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