濾泡輔助性T細(xì)胞（Follicular T helper cells, Tfh cells）是一類主要定位于淋巴濾泡生發(fā)中心（Germinal center, GC）的CD4+?輔助性T淋巴細(xì)胞亞群，它在誘導(dǎo)B細(xì)胞激活、分化、產(chǎn)生抗體過程中發(fā)揮作用，廣泛參與體液免疫反應(yīng)【1】。Tfh細(xì)胞的異常活化和分化會擾亂生發(fā)中心對于B細(xì)胞的選擇，從而影響自身抗體的分泌。而新近發(fā)現(xiàn)的濾泡調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞?（Follicular T regulatory cells,Tfr cells）?是一類特殊的調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞亞群，其能特異性地通過抑制Tfh 細(xì)胞和B 細(xì)胞以抑制GC 反應(yīng)【2】。Tfh細(xì)胞參與多種自身免疫性疾病的發(fā)病，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus, SLE）。SLE中常伴有大量生發(fā)中心的形成，這有助于自身抗體的產(chǎn)生，繼而引起結(jié)締組織中的炎癥。研究表明，系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)庵苎獑魏思?xì)胞（PBMC）中的循環(huán)Tfh（cTfh）細(xì)胞數(shù)量增加，與自身抗體滴度和疾病進(jìn)展呈正相關(guān)?【3-5】。因此，針對Tfh細(xì)胞的靶向性治療有助于恢復(fù)免疫耐受以達(dá)到治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的目的。

腺病毒E4啟動子結(jié)合蛋白-4（E4BP4）是哺乳動物細(xì)胞核內(nèi)的一種堿性亮氨酸拉鏈?(bZIP)?型轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控細(xì)胞的存活和增殖【6】。已有研究表明E4BP4參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞譜系的發(fā)育和功能，還可以調(diào)節(jié)B細(xì)胞的IgE類別轉(zhuǎn)換，T細(xì)胞極化反應(yīng)和細(xì)胞因子的表達(dá)【7-10】。該課題組前期已證明E4BP4在SLE患者CD4+?T細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，并可通過抑制CD40L基因的表達(dá)抑制T細(xì)胞自身反應(yīng)性活化。盡管E4BP4在免疫細(xì)胞發(fā)育和功能中起著重要作用，但其對Tfh細(xì)胞分化和功能的調(diào)控、以及在自身免疫性疾病中的機(jī)制研究尚不清楚。

2020年6月2日，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院皮膚科（醫(yī)學(xué)表觀基因組學(xué)湖南省重點實驗室）陸前進(jìn)、趙明課題組在Journal of clinical investigation雜志在線發(fā)表題為E4BP4 mediated inhibition on T follicular helper cell differentiation is compromised in autoimmune diseases的研究論文。

該研究揭示了轉(zhuǎn)錄因子E4BP4介導(dǎo)的負(fù)反饋調(diào)控對Tfh細(xì)胞分化的抑制作用及機(jī)制探討；并發(fā)現(xiàn)SLE患者CD4+?T細(xì)胞中 E4BP4的磷酸化水平缺陷影響了E4B4P的功能，可能是SLE中Tfh細(xì)胞及自身抗體的異常增多的原因之一。該研究揭示了抗體介導(dǎo)的自身免疫疾病發(fā)病新機(jī)制，幷為治療提供了新途徑和新靶標(biāo)。

首先，研究人員通過比較E4BP4在野生型小鼠（wild-type，WT）免疫模型和人類扁桃體組織不同亞群CD4+?T細(xì)胞中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)E4BP4在Tfh細(xì)胞中表達(dá)明顯升高。表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示在E4BP4敲除鼠的Tfh細(xì)胞中，Tfh細(xì)胞特征性基因Bcl6, Il21, Pdcd1, Tcf7, Pou2af1, Cd40lg?和Tiam1等表達(dá)上調(diào)， 而Tfr細(xì)胞特征性基因FoxP3, IL10?和?Ctla4等表達(dá)下調(diào)。研究者進(jìn)一步通過在T細(xì)胞中構(gòu)建條件性敲除（conditional Knockout）或敲入（conditional knockin）E4bp4基因小鼠發(fā)現(xiàn)，Tfh細(xì)胞的比例在E4BP4敲除鼠中明顯增加，并伴隨有Tfr細(xì)胞比例的下降，生發(fā)中心B細(xì)胞比例的上調(diào)及IgG抗體分泌的增加。另一方面，該研究發(fā)現(xiàn)E4BP4缺失會顯著加重Pristane誘導(dǎo)的小鼠狼瘡樣表型。表現(xiàn)為在E4bp4基因敲除鼠體內(nèi)自身抗體明顯增加，伴隨有Tfh細(xì)胞和B細(xì)胞比例的增加，以及明顯加重的腎臟狼瘡樣的病理改變。

BCL-6作為Tfh細(xì)胞分化途徑上的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子, 可調(diào)控Tfh細(xì)胞的增殖、分化?【11】。研究通過染色質(zhì)免疫共沉淀和高通量測序技術(shù)（ChIP-Seq）等技術(shù)證明 了E4BP4可以結(jié)合在Bcl6基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游的啟動子區(qū)來調(diào)節(jié)該基因的轉(zhuǎn)錄。通過免疫共沉淀(CO-IP)法進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)E4BP4可以募集抑制性表觀遺傳修飾子組蛋白去乙?；窰DAC1（Histone Deacetylase 1，HDAC1）和組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2（Enhancer of zeste homolog 2，EZH2）來抑制Bcl6基因的轉(zhuǎn)錄。

另一方面，研究者通過設(shè)計不同E4BP4蛋白的磷酸化突變體證實，E4BP4磷酸化缺失會損害其抑制Tfh細(xì)胞分化和BCL6基因表達(dá)的能力。而有意思的是在SLE CD4+?T 細(xì)胞中，該研究發(fā)現(xiàn)E4BP4的磷酸化水平是明顯降低的，提示E4B4P的磷酸化缺陷可能是SLE患者體內(nèi)發(fā)生過度自身免疫反應(yīng)的原因之一。

總的來講，這項研究揭示了E4BP4在調(diào)節(jié)體液免疫和自身免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵作用，為理解系統(tǒng)性紅斑狼瘡的免疫學(xué)機(jī)理提供了新的視角，并為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療和以E4BP4為靶點的藥物開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

據(jù)悉，趙明研究員和博士生王子君為該論文的并列第一作者，中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院為第一作者單位，陸前進(jìn)教授為獨立通訊作者。

本文轉(zhuǎn)載自BioArt公眾號