讓實驗結果更穩(wěn)定 更可靠:小鼠凈化
小師弟:師姐,求助!我之前已經做了一批實驗,結果挺好的,但是后面小鼠繁育比較慢,養(yǎng)了很久,終于得到幾只實驗組,但是實驗結果和上一組居然不一致,怎么辦?
大師姐:不急不急。你可能要找一下源頭,小鼠繁育能力突然下降可能是發(fā)生感染,你有注意到小鼠有什么變化嗎?
小師弟:哦!好像除了生的少,精神狀態(tài)也不太好,毛發(fā)也沒有以前那么光亮,還死了2只。
大師姐:那應該就是發(fā)生感染了,建議盡快做凈化,否則會影響整個品系,對實驗的影響也更大。
小師弟:懂了!謝謝師姐!
保持實驗鼠的健康,對于實驗結果的穩(wěn)定性和可重復性至關重要。但在實際操作中,實驗鼠由于各種原因導致感染的情況屢見不鮮。被細菌,病毒和體內外寄生蟲感染的小鼠,不僅自身健康受到威脅,混淆研究成果,甚至還有可能傳播給其他品系的小鼠,因此小鼠的凈化非常關鍵和必要。
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何時需要凈化?
在正常的飼養(yǎng)過程中,如果小鼠狀態(tài)正常,凈化是不必要的,但是遇到以下情況建議凈化:
動物實驗結果不穩(wěn)定,重復性差,實驗鼠已經確認受到病原體污染;
懷疑受到感染,但是已經出現(xiàn)以下癥狀:繁殖能力降低,實驗鼠健康狀態(tài)不好,已經影響到實驗鼠生命或者影響實驗結果;
進口鼠漂洋過海來到國內動物房,需要隔離檢疫以及凈化;
實驗鼠要“搬家”,“新家”的屏障系統(tǒng)更嚴格。
如何凈化?
凈化通俗點講,是將確認病原體感染或者疑似感染的“臟臟鼠”傳代獲得不含特定病原體的子代鼠。從小的方面講,凈化是為了實驗鼠品系的健康不受到威脅,保證后續(xù)實驗不受病原體感染影響,從大方面講,也是為動物屏障內其他品系的健康保駕護航。
那么凈化如何做?洗洗澡?噴點酒精?
NO,NO,NO!
要是那樣能做到凈化就真的太好了,因為真正的凈化類似“殺雞取卵”:實驗鼠自身雖然被感染,但是精子或卵細胞在體內是干凈無菌,很多情況下凈化是要從感染的親本中,獲得“干凈”的子代。因此小鼠凈化是“犧牲我一個,健康你我它”的壯舉,需要為之付出生命代價。
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凈化方式1---剖腹產
由于胎盤屏障會隔絕大部分病原微生物,因此可以通過剖腹產的方式,取出后代鼠,從而獲得沒有被感染的新一代實驗鼠。剖腹產過程中,為了避免子代受到感染,母鼠處死后以及剖出的鼠仔都要消毒。此外還要提前準備好代乳奶媽,提前做好食仔預防,剖出的鼠仔后續(xù)要由奶媽代養(yǎng)。
優(yōu)點:實驗鼠自然交配即可,凈化快
缺點:
獲得子代數(shù)量有限
需要精確掌握母鼠的生產時間,在母鼠生產前進行剖腹產,否則剖出的鼠仔就屬于早產,后續(xù)飼養(yǎng)也有比較高的死亡風險。
垂直傳播的病原微生物感染是不能通過該種方式進行。
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凈化方式2---體內胚胎移植
將雄鼠和超排后的雌鼠交配,然后處死見栓的雌鼠,通過沖洗輸卵管的方式收集受精卵,胚胎移植到無感染的假孕母鼠輸卵管或者子宮中,從而獲得凈化后的實驗鼠品系。
優(yōu)點:獲得的子代鼠仔是足月生產
缺點:
獲得子代數(shù)量有限
檢栓后,見栓的雌鼠都會被處死,但是處死后不一定都能取到受精卵,因此有可能出現(xiàn)斷種。
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凈化方式3:體外受精后胚胎移植(IVF凈化):
雄鼠處死后取精子,然后將激活后的精子與超排的卵母細胞進行體外受精(IVF, in vitro fertilization)得到受精卵,再移植到代孕小鼠的子宮中,生育出凈化的子代鼠仔。該方式是目前最popular的凈化方式。
優(yōu)點:
IVF技術可以實現(xiàn)1只雄鼠對應10-20只雌鼠同時受孕,因此IVF凈化,在凈化的同時,還能達到快速繁育的目的,同時獲得更多數(shù)目的子代鼠,效率高,縮短繁育周期,極大地加快科研進度。
缺點:有一定技術門檻
3種凈化方式,如何選擇?
由于剖腹產存在“早產”和食仔的風險,為了減少對后續(xù)實驗的影響,現(xiàn)在很少采用這種方式。而體內胚胎移植和IVF凈化這兩種凈化方式,可以根據(jù)現(xiàn)有小鼠情況以及后續(xù)實驗需要而定:
凈化類型 |
需提供親本數(shù)量 |
子代數(shù)量 |
IVF凈化 |
雄鼠: ≥ 8 周齡,≥ 2 只 |
6–10 只新生小鼠 |
體內胚胎移植 |
雄鼠: ≥ 8 周齡,≥ 2 只 |
新生小鼠(具體數(shù)量視雌鼠數(shù)量及周齡而定) |
雌鼠: 3–8 周齡,≥ 4 只 | ||
IVF凈化+ 快速繁育 |
雄鼠: ≥ 8 周齡,≥ 2 只 |
30–50 只新生小鼠 |
凈化后的實驗鼠通常是SPF級的,為了確保凈化效果,凈化完成后會將小鼠品系單獨送檢,檢測合格后,艱巨而偉大的凈化任務就完成了!在此致敬為凈化而做出犧牲的親代鼠!
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