在這里您可以檢索產(chǎn)品與服務(wù)的常見問題，并找到答案。也可以進(jìn)入資源與支持欄目，在產(chǎn)品手冊(cè)頁面下載FAQ電子版手冊(cè)。
并非所有品系均如此。一些表達(dá)Cre 的品系即使在同窩小鼠中，Cre 表達(dá)也有可能相差甚遠(yuǎn)。另外Cre 表達(dá)呈現(xiàn)鑲嵌
模式的品系也值得注意。使用這些小鼠你可能發(fā)現(xiàn)很大的實(shí)驗(yàn)差異，也很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。為了獲得有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)結(jié)論，
可能需要分析更多小鼠的表型。
Cre 由腦特異性的啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，那Cre 只在腦中表達(dá)嗎？事實(shí)并非如此。研究發(fā)現(xiàn)大部分品系在其它組織中也有Cre
活性。舉個(gè)列子，Emx1-Cre 小鼠除了大腦外，在腎臟和胸腺中也表達(dá)Cre。
將人雌激素受體（estrogen receptor，簡(jiǎn)稱ER）的配體結(jié)合區(qū)（LBD）與Cre 重組酶相融合，形成定位于胞漿中的融合蛋白（Cre-ER）。只有在雌激素誘導(dǎo)后，融合的 Cre 蛋白才會(huì)通過構(gòu)象變化從錨定蛋白 HSP90上解離下來，進(jìn)入細(xì)胞核，識(shí)別loxP 位點(diǎn)并發(fā)生重組。這樣就通過控制雌激素的注射時(shí)間，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)基因重組時(shí)間特異性的調(diào)控。
為了避免內(nèi)源雌激素的干擾，在配體結(jié)合區(qū)做一個(gè)點(diǎn)突變（G521R）就可以使 Cre-ER 只響應(yīng)外源的人工合成雌激素（比如：Tamoxifen、4-OHT）的誘導(dǎo)，命名為 Cre-ERT。而另一種LBD 突變體融合蛋白被證明對(duì)4-OHT 具有遠(yuǎn)高于Cre-ERT 的敏感性，這種突變體就是大名鼎鼎的Cre-ERT2。它帶有人ER LBD 中的3 個(gè)點(diǎn)突變：C400V/M453A/L544A。
圖6. Tamoxifen 誘導(dǎo)Cre 作用示意圖。（圖片來自Inducible CreMice. Methods in Molecular Biology 530:343-63 February 2009）。
條件性基因敲除小鼠（也叫Flox 小鼠）是指在目的基因中含有成對(duì)的loxp 位點(diǎn)的小鼠，與Cre 工具小鼠交配后可在
特定的組織或細(xì)胞中敲除目的基因。
方案一
若Flox 小鼠與廣泛表達(dá)或生殖細(xì)胞特異Cre 小鼠交配，則可以獲得全身基因敲除的KO 小鼠，繁育流程如圖所示。ES
打靶載體中篩選基因neo 在兩個(gè)loxp 之間，不需要單獨(dú)去neo，結(jié)構(gòu)為5’ arm-loxp-flox-frt-neo-frt-loxp-3’ arm，直
接配生殖腺表達(dá)的Cre 可同時(shí)去除neo 基因。
圖3. 由條件性基因敲除小鼠獲得全身性基因敲除純合子小鼠繁育流程。
方案二
若與組織特異性Cre 小鼠交配，則可以按照?qǐng)D4 所示流程進(jìn)行繁殖，一般采用轉(zhuǎn)入Cre 重組酶的flox 雜合子小鼠與
flox 雜合子小鼠交配的方式獲得Cre 酶整合的flox 純合子條件基因敲除小鼠。此時(shí)，一般選擇同窩出生的Cre 酶未整
合的flox 純合子小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。
圖4. 組織特異性基因敲除小鼠繁育流程1。
方案三
也可以采用圖5 的方案提高實(shí)驗(yàn)組小鼠比例。
圖5. 組織特異性基因敲除小鼠繁育流程2。
對(duì)于近交系背景的基因敲除或基因突變小鼠而言，一般采用雜合子與雜合子交配的方式獲得純合子基因敲除或突變小
鼠。此時(shí)，一般選擇同窩出生的野生型或雜合子小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。
圖2. 全身性基因敲除小鼠繁育流程。
基因敲除小鼠去neo
如果基因功能可能完全喪失且基因組周邊無緊鄰的其他基因，可以選擇不去neo；如果只是敲除某個(gè)功能域，
可能有部分功能的蛋白出現(xiàn)，或者敲除基因周邊有其他基因存在，建議必須去neo，以免出現(xiàn)并不是該基因敲
除的表型。在時(shí)間充裕的情況下，為避免neo 引發(fā)的其他表型，建議去除neo 基因。
在獲得轉(zhuǎn)基因首建鼠之后，可以根據(jù)以下流程來建立轉(zhuǎn)基因品系。
圖1. 隨機(jī)插入轉(zhuǎn)基因小鼠建系過程。
|
Piggybac 轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因需注意
Piggybac 轉(zhuǎn)座酶傾向于將目的片段插入到轉(zhuǎn)錄活躍的區(qū)域，大大提高了獲得目的基因表達(dá)陽性Founder 鼠的
概率，但Piggybac 轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)介導(dǎo)的基因插入存在多位點(diǎn)整合的可能。由于多位點(diǎn)整合的存在，在Founder
鼠后續(xù)傳代繁育的過程中，伴隨多整合位點(diǎn)的分離，會(huì)出現(xiàn)以下現(xiàn)象：1. 基因型鑒定陽性小鼠比例高于單位點(diǎn)
插入；2. 后代陽性小鼠目的基因表達(dá)量較Founder 鼠低（表達(dá)降低的量依賴于Founder 鼠中整合位點(diǎn)的數(shù)量
和整合位置），且相互之間不一致。故建議：每個(gè)Founder 鼠與野生型小鼠至少回交繁殖2–3 代以獲得外源基
因單位點(diǎn)整合，且穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠。
哨兵鼠主要是指將背景健康的外源小鼠引入重要的繁殖飼養(yǎng)群體，通過直接接觸目的鼠或間接接觸臟墊料的方式對(duì)飼養(yǎng)區(qū)域進(jìn)行病原微生物的檢測(cè)，并替代重要飼養(yǎng)群體進(jìn)行健康體檢的一類小鼠。通常未受特定病原污染的大于 4w以上健康小鼠（免疫缺陷鼠除外）可選作哨兵鼠。哨兵鼠的品系可根據(jù)需要選擇，如：ICR（CD1）、BALB/c、FVB、 C57BL/6等等。哨兵鼠一般2–3只一籠，放置于所在籠架的最后一個(gè)回風(fēng)位。一般一籠哨兵動(dòng)物監(jiān)控60–100籠的飼養(yǎng)架。哨兵鼠所用的墊料為這些飼養(yǎng)籠中其它小鼠生活過的臟墊料大約每籠 30–50g，且必須在臟墊料內(nèi)至少持續(xù)生活 4 周以上。一般國標(biāo)規(guī)定三個(gè)月為一個(gè)檢測(cè)周期，通過對(duì)哨兵鼠的檢測(cè)，可以在不影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的情況下，實(shí)監(jiān)控環(huán)境中病原體的狀況，保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化，保障實(shí)驗(yàn)研究獲得可重復(fù)的結(jié)果。哨兵動(dòng)物檢測(cè)也有局限性對(duì)于通過空氣傳播的，非接觸性傳播的病原微生物會(huì)漏檢。如仙臺(tái)病毒，嗜肺巴斯德桿菌等。因此建議對(duì)于隨機(jī)動(dòng)物也要進(jìn)行檢測(cè)。
當(dāng)小鼠繁殖過程出現(xiàn)子代數(shù)量減少、甚至不產(chǎn)仔的情況，可考慮是否有以下幾個(gè)方面的問題：
飼養(yǎng)環(huán)境噪音過大：在小鼠的繁殖飼養(yǎng)過程中，應(yīng)盡量減少噪音，保證小鼠在安靜的環(huán)境中生活
孕鼠受到外界壓力刺激：母鼠在懷孕后應(yīng)盡量減少對(duì)孕鼠的操作和環(huán)境改變，孕鼠及哺乳期的母鼠在受到外界刺激后可能出現(xiàn)食仔或棄養(yǎng)幼仔的情況
雄鼠與雌鼠合籠時(shí)間過短：應(yīng)盡量保證雄鼠雌鼠的合籠時(shí)間，以增加交配幾率。另外，孕鼠臨產(chǎn)時(shí)不要從籠中取出交配雄鼠，也不要在子代小鼠未斷奶前將雄鼠重新放入繁殖籠內(nèi)
增加環(huán)境暗度：避免在夜晚節(jié)律中有不必要的亮光，影響小鼠的晝夜節(jié)律
無法筑巢：在籠中提供柔軟的纖維材料，如：棉絮、紙巾或軟木絮等，有助于提供安全舒適的生產(chǎn)環(huán)境，提高產(chǎn)量
營養(yǎng)缺陷：小鼠飲食中若脂類成分過高或過低、蛋白質(zhì)攝入不足或過剩都會(huì)影響小鼠生育。另外，可適當(dāng)提供生育酚的來源，如：瓜子、堅(jiān)果等
一般來說，至少需要 2–4 對(duì)育齡小鼠用來進(jìn)行品系的繁育。若特殊品系的小鼠有生育缺陷或需要加快繁育速度，那么可以擴(kuò)大交配數(shù)量?；虿捎?IVF 快速繁育方法，則只需要提供 2–3 只有生育能力的雄鼠即可。
小鼠資源庫中的繁育代數(shù)信息說明如下：
N：表示小鼠回交代數(shù)。例如：N1 表示回交第 1 代；N2 表示回交第 2 代。
F：表示子代代數(shù)或近交代數(shù)（同窩交配）。例如：F1 表示子一代；F2 表示子二代。
p：表示所示代數(shù)為胚胎保存時(shí)的代數(shù)。例如：F3p 表示該品系在子三代時(shí)凍存了胚胎。
